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菌液在-20度冰箱可以放多久

发布时间: 2025-05-21 12:23

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菌液在-20度冰箱通常可保存3-6个月,实际保存时间受菌种类型、保护剂添加、冻存管密封性、反复冻融次数及初始菌液浓度等因素影响。

1、菌种类型:

不同微生物对低温耐受性差异显著。乳酸菌等革兰氏阳性菌细胞壁较厚,-20℃下存活率较高;而部分肠道菌群如脆弱拟杆菌对冷冻敏感,存活期可能缩短至1-2个月。放线菌孢子形态保存效果优于营养体,部分芽孢杆菌可存活1年以上。

2、保护剂添加:

添加15%甘油或5%二甲基亚砜能形成玻璃态保护层,防止冰晶损伤细胞膜。含脱脂牛奶或海藻糖的冻存液可使菌液保存期延长30%-50%,未添加保护剂的菌液活性可能3个月内下降90%。

3、冻存管密封性:

使用螺纹盖冻存管配合密封膜可有效防止水分升华,避免样品脱水。普通EP管密封性差,每月约损失0.5%体积,3个月后菌液浓缩可能导致渗透压失衡。

4、反复冻融:

每次冻融会使存活率降低10%-20%。金黄色葡萄球菌经5次冻融后活菌数下降60%,建议分装为小份量保存。解冻后未用完的菌液不建议二次冷冻。

5、初始浓度:

高浓度菌液>10^8CFU/ml抗冻性更强,低浓度菌液<10^6CFU/ml易因冰晶挤压导致细胞破裂。结核分枝杆菌悬液浓度低于10^5/ml时,-20℃保存1个月后可能完全失活。

长期保存建议采用-80℃超低温环境,定期检查冰箱温度波动。冻存前进行梯度降温4℃→-20℃→-80℃,使用专用菌种冻存管标注菌株编号、日期及代次。复苏时采用37℃水浴快速融化,配合营养培养基活化。重要菌种应制备甘油管保藏并异地备份,实验室常规使用菌液建议每3个月转接新鲜培养物。

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发布于 2025-05-21

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